酶联免疫法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种广泛应用于生物医学领域的免疫学检测技术，用于检测和量化样本中的特定蛋白质、抗体、抗原或其他生物分子。以下是其基本原理、类型、应用和注意事项的详细解释：

一、基本原理

1. 免疫反应基础

   • ELISA基于抗原-抗体特异性结合的原理。抗原是待检测的目标分子，抗体是与之结合的免疫蛋白。

2. 酶标记

   • 使用酶（如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶）标记抗体或抗原。当结合发生时，酶催化底物产生颜色变化或其他可检测信号，从而量化目标分子。

二、主要类型

1. 直接ELISA

   • 酶直接标记在检测抗体上，简单快速，但灵敏度较低。

2. 间接ELISA

   • 使用未标记的一抗和酶标记的二抗，提高灵敏度和灵活性，常用于抗体检测。

3. 夹心ELISA

   • 使用两种抗体（捕获抗体和检测抗体）夹住抗原，特异性高，适用于抗原检测，如病毒或激素。

4. 竞争ELISA

   • 样本中的抗原与标记抗原竞争结合抗体，用于小分子或低丰度物质的检测。

三、应用领域

1. 医学诊断

   • 检测传染病（如HIV、COVID-19）、自身免疫疾病、过敏原和肿瘤标志物。

2. 科研研究

   • 用于蛋白质定量、基因表达分析和药物开发。

3. 食品安全

   • 检测食品中的病原体、毒素或过敏原。

四、优点与局限性

1. 优点

   • 高灵敏度、高特异性、操作相对简单、可高通量自动化。

2. 局限性

   • 可能受交叉反应干扰、需要特定抗体、成本较高，且结果需谨慎解读以避免假阳性或假阴性。

五、注意事项

1. 样本处理

   • 确保样本无污染，避免反复冻融影响抗原活性。

2. 质量控制

   • 使用阳性对照和阴性对照验证实验准确性。

3. 专业操作

   • 建议在实验室环境下由 trained personnel 执行，以确保结果可靠。